A actividade laboratorial realizada no Laboratório Aberto permite aos alunos experimentar duas técnicas abordadas no âmbito do programa da disciplina: a técnica de amplificação do DNA por PCR (reacção de polimerização em cadeia) e a técnica de corrida de electroforese. 1. Destinatários Alunos do Ensino Secundário (a actividade subjacente ao presente documento foi realizada com alunos de Biologia – 12º ano). 2. Enquadramento programático Unidade 2 – Património Genético. Alterações do património genético. Técnicas de Engenharia Genética. 3. Pré-requisitos Conhecimentos da natureza do DNA, da acção das enzimas de restrição e das técnicas subjacentes à actividade. Competências básicas no trabalho de laboratório.
4. Objectivos Realizar actividades laboratoriais de manipulação de DNA com vista à compreensão global de processos biotecnológicos envolvidos. Compreender a importância do DNA enquanto factor de identificação genética do indivíduo. Avaliar a importância biológica das enzimas de restrição no contexto da Engenharia Genética. Identificar alimentos geneticamente modificados com recurso a técnicas laboratoriais avançadas. Reflectir sobre implicações biológicas que decorrem da obtenção de organismos geneticamente modificados.
5. Actividade Laboratorial Actividade I - O CÓDIGO DA VIDA: O CRIMINOSO Com esta actividade os alunos são convidados a tentar encontrar um criminoso de entre um conjunto de suspeitos. Material utilizado Microtubos coloridos Micropipetas Enzimas (ENZ) Centrifugadora Estufa Tina de electroforese Placa de gel de agarose
Duração aproximada - 2:30 horas A actividade desenvolve-se em duas etapas: Etapa 1 – Preparação das amostras de DNA - Uma amostra de DNA encontrado na cena do crime e as amostras de DNA de cinco suspeitos são pipetadas, transferidas e identificadas pelos alunos em microtubos coloridos. Segue-se a adição de enzimas de restrição, centrifugação e colocação em estufa. Etapa 2 – Carregamento das amostras de DNA e corrida de electroforese - Numa tina de electroforese, as amostras são preparadas e carregadas pelos alunos nos respectivos poços. A fonte de alimentação é programada para a corrida desejada.
Algumas fases do trabalho desenvolvido ao longo das actividades Actividade II - O RASTREIO DOS TRANSGÉNICOS Com esta actividade os alunos são convidados a testar alguns alimentos, utilizando técnicas laboratoriais avançadas, para determinar se estes são ou não transgénicos. Material utilizado - Solução InstaGeneTM
- Alimentos a testar (milho, tomate, soja, ervilha)
- Micropipetas e pontas
- Tubos screwcap
- Balança electrónica
- Almofariz
- Bloco Térmico
- Centrifugadora
- Microtubos de PCR
- Termociclador
- Tina de eletroforese
- Placa de gel de agarose
- Fonte de radiação UV
Duração aproximada - 3:00 horas A actividade desenvolve-se em três etapas: Etapa 1 – Preparação das amostras de alimentos - Cada amostra de alimento é preparada, incubada e centrifugada. Etapa 2 – Amplificação do DNA por PCR - São preparados microtubos de PCR pelos alunos que, seguidamente, os colocam no termociclador. Etapa 3 – Carregamento dos produtos de PCR e corrida de electroforese - Numa tina de electroforese, as amostras são preparadas e carregadas pelos alunos nos respectivos poços. A fonte de alimentação é programada para a corrida desejada. 6. Discussão dos resultados Relatório da actividade elaborado por cada aluno. 7. Fontes e referências http://www.laboratorioaberto.pt/inicio.php http://www.ipatimup.pt/default-pt.htm
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